reforef.ru 1

УДК 615.9(06)+577.3(06) Биофизика


А. А. КИРСАНОВА, Н.В. СТОЙНОВА1

Московский инженерно-физический институт (государственный университет)

1ЗАО «Научно-исследовательский институт Аджиномото-генетика», Москва
СОЗДАНИЕ СИСТЕМЫ ПРЕЦИЗИОННОГО КЛОНИРОВАНИЯ ПРОТЯЖЁННЫХ ФРАГМЕНТОВ ДНК E. COLI
В генно-инженерной практике для клонирования фрагментов ДНК обычно используют амплификацию указанных фрагментов in vitro при помощи ПЦР, что не позволяет получать протяженные фрагменты ДНК (более 100 т.п.н.) с достаточной точностью. Предложен метод клонирования длинных фрагментов ДНК с помощью прецизионного введения в геном E. сoli сайтов рестрикции, узнаваемых мегануклеазой I-Sce I S. cerevisiae. Предполагается введение I-Sce I сайтов рестрикции в геном штаммов E. coli с делециями всех отдельных рамок считывания. Проведен дизайн олигонуклеотидных праймеров для интеграции I-Sce I сайтов и создания интегративных векторов, содержащих сайт рестрикции I-Sce I, а также получены препараты векторных плазмид, предполагаемых к использованию для конструирования.




ISBN 978-5-7262-1042-1. НАУЧНАЯ СЕССИЯ МИФИ-2009. Том 2